基于外泌體相關(guān)基因的全基因組微擾分析篩選系統(tǒng)
發(fā)布時(shí)間：
2024-07-12
來源：
https://doi.org/10.1101/2023.09.07.556640
作者:陸路1#，尹建新1#，陳寧1#，郭曉飛1#，韓春樂1#，王淼1#，杜煥青1#，李慧芳1#，潘新剛1#，高夢(mèng)雅1#，王娜1#，齊冬麗1#，王建紅1#，董鳳偉1#，李天石2 #，葛嘯虎1*
發(fā)布日期:2023-09-08
摘要:據(jù)報(bào)道，外泌體對(duì)體內(nèi)生理和病理狀態(tài)有重要影響。外泌體作為一種藥物傳遞載體已被廣泛研究，一些外泌體藥物已進(jìn)入臨床研究階段。外泌體的產(chǎn)生、運(yùn)輸和分泌機(jī)制仍有待深入研究。因此，在這里，我們開發(fā)了一種新的基于CRISPR uni的基因篩選系統(tǒng)，通過該系統(tǒng)，我們可以在全基因組范圍內(nèi)揭示外泌體的生物發(fā)生、運(yùn)輸和攝取機(jī)制。該系統(tǒng)由兩部分組成:一部分是基因敲除組件;另一部分是一個(gè)獨(dú)特的分子標(biāo)識(shí)(UMI)標(biāo)記組件，它可以標(biāo)記敲除細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體，其中每個(gè)sgRNA對(duì)應(yīng)一個(gè)特定的UMI。這樣，通過檢測(cè)外泌體中裝載的UMI，我們可以追蹤敲除基因。在本研究中，我們首先分別使用質(zhì)粒和慢病毒驗(yàn)證了每個(gè)組分的功能。接下來，我們使用單個(gè)慢病毒模擬慢病毒庫對(duì)細(xì)胞的感染，以驗(yàn)證篩選系統(tǒng)的功能。最后，我們構(gòu)建了一個(gè)基于crispr - uni的文庫，針對(duì)15個(gè)基因(對(duì)外泌體生物發(fā)生有明確影響的基因)，進(jìn)一步驗(yàn)證篩選系統(tǒng)的可靠性。該篩選系統(tǒng)的開發(fā)對(duì)于深入研究外泌體的產(chǎn)生和分泌機(jī)制，以及提高外泌體的產(chǎn)生和體外循環(huán)功能具有重要的意義。
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